Il modello cellulare è sottoposto a test di vitalità cellulare realizzati con l’ausilio di “AlamarBlue®”, un reagente che si basa su un processo molto semplice e affidabile. Una molecola di piccole dimensioni, di colore blu (Resazurina) penetra la membrana della cellula e viene a contatto con l’ambiente interno. Se la cellula è in buono stato di salute, i processi che normalmente avvengono al suo interno sono in grado di convertire la Resazurina in una molecola differente (Resorufina), di colore rosa.
Tale processo è tanto più efficace quanto più una cellula è in salute e, al contrario, risulterà meno efficace se la cellula si trova in stato di sofferenza.
Attesi i tempi necessari per una completa reazione delle cellule, si misura la quantità di Resorufina (la forma fluorescente) tramite lettura della fluorescenza allo spettrofotometro e si potranno così misurare il livello di vitalità cellulare del modello e il conseguente grado di tossicità del liquido iniziale.
Gli organi (ad esempio i polmoni) sono composti da tessuti, a loro volta composti da cellule. Queste ultime formano un tessuto creando tra loro connessioni stabili, proprio come dei mattoni sono saldati tra loro in un muro portante. Queste connessioni sono quindi fondamentali per garantire la struttura del tessuto, a sua volta necessaria per fornire la funzionalità dell’organo.
La riduzione dell’adesione tra cellule porta ad uno sfaldamento del tessuto, e una conseguente riduzione della funzionalità dell’organo (in questo caso l’organismo manifesta una patologia respiratoria).
Il grado di adesione tra cellule, correlato alla funzionalità del tessuto, può essere misurato come la capacità delle cellule di impedire il passaggio di corrente. Per misurarlo si applicano due elettrodi a cavallo della struttura cellulare: maggiore il passaggio di corrente rilevato, maggiore sarà la disgregazione del tessuto e quindi maggiore l’effetto tossico delle sostanze a contatto con le cellule.
In presenza di un fattore di stress (fumo di sigaretta, alcol, virus, patogeni, parassiti, ecc) le cellule del corpo umano reagiscono rilasciando molecole che mediano il processo infiammatorio. Tra le più importanti sono da segnalare quelle appartenenti alla famiglia delle interleuchine “IL”, in particolare la IL-6 e la IL-8.
L’infiammazione è un processo molto complesso, controllato da numerosi fattori, che può coinvolgere interi organi. Lo scopo del processo infiammatorio è quello di richiamare l’attenzione del sistema immunitario e, nella sede del fattore di stress, di attivare le cellule più competenti in grado di risolvere il problema. Questo processo normalmente richiede del tempo ed esita in una completa guarigione (pensiamo per esempio al risolversi di una ferita).
Se il fattore di stress permane per lungo tempo, oltre agli effetti diretti dovuti all’esposizione cronica a questo fattore possono insorgere anche ulteriori conseguenze collaterali dovute alla continua risposta infiammatoria che il corpo mette in atto per difendersi. Un sistema immunitario troppo stimolato infatti può iniziare a colpire anche le cellule dello stesso organismo, con conseguenze negative sulla salute.
Numerosi studi hanno già ampiamente dimostrato che la sigaretta tradizionale ha un elevato potere pro-infiammatorio a causa di diverse sostanze presenti nel fumo e alla esposizione frequente dovuta all’attività del fumatore.
Per valutare se i vapori degli e-liquid possono causare gli stessi effetti del fumo sul tessuto polmonare, misuriamo le quantità di IL-8 tramite test basati sulla tecnologia immunoenzimatica (ELISA) sia nel comparto apicale (dove si sviluppano le cellule dell’epitelio polmonare) sia nel comparto basale (dove si sviluppano le cellule dell’endotelio vascolare).
L’attuale Direttiva Tabacchi (TPD) che comprende i prodotti alternativi come le sigarette elettroniche e relativi liquidi, prevede che i produttori conducano a proprie spese un accertamento della presenza di alcune sostanze tossiche nelle emissioni. I singoli Stati Membri hanno la responsabilità di stabilire quali sono questi parametri e i criteri per stabilire la pericolosità. Attualmente la Francia e il Regno Unito hanno fornito delle linee guida o norme tecniche nazionali, che prevedono di determinare la presenza di x sostanze chimiche potenzialmente tossiche. In particolare la Francia (tramite le norme AFNOR) prevede l’analisi di nicotina, diacetile, aldeidi e metalli pesanti; mentre il Regno Unito (tramite l’ente MHRA) richiede l’analisi di: nicotina, acetaldeide, acroleina, formaldeide e in base alla combinazione liquido/device vengono richiesti anche dietilene glicole, etilene glicole, diacetile, 2,3 pentanedione, e le due nitrosammine (NNN e NNK), per un totale di 10 parametri.
Al fine di tutelare al massimo la salute dei propri consumatori, FlavourArt ha determinato 23 parametri per ogni prodotto messo sul mercato Europeo. Nel programma ClearStream Onward vengono visualizzati 22 dei 23 parametri testati perchè la nicotina non viene mostrata, in quanto essendo presente per definizione, non rappresenta un fattore di rischio aggiunto.
